样本制备原则1. 代表性原则取样的代表性关系到实验结果是否具有科学意义，应根据实验目的慎重选择取样方案。应做到实验组与对照组的样本在取材时间、部位、处理条件等方面尽可能保持一致，保证实验结果的可信度。2. 准确性原则准确记录代表性样本的各种特征数据，按要求（低温、迅速）采集、制备、贮存、运输，最终正确地按实验设计进行实验和数据处理。3. 迅速性原则样本质量影响实验结果的最关键因素，在采集、制备、贮存、运输过程中应尽可能地做到迅速，最大限度的缩短从样本采集到实验的时间。4. 低温原则所取样本离体后，应尽快置于干冰或-80℃冰箱中，并保证在实验前始终处于-70℃以下，以避免外泌体降解。  1. 贴壁/悬浮细胞1.1 细胞上清1. 贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；2. 加入适量的PBS 缓冲液冲洗一次，彻底去除FBS；3. 按每10cm皿（约107细胞）10ml培养基，换无血清替代培养基培养至少48hr（细胞融合率至少70%以上）；4. 48hr后，收集细胞上清，并于3000×g离心15min，去除细胞或细胞碎片；5. 放入-80℃冰箱中保存。注意事项： 1、细胞生长正常。换无血清替代培养基（或无外泌体血清培养基）时的细胞密度与收培养上清时的细胞密度，一定要有显著增长，例如从60~70%长到90~95%。如细胞无显著增殖生长无须收样检测，因基本无多少外泌体分泌。避免细胞长得过满导致细胞凋亡，细胞凋亡可能降解外泌体2、及时离心处理。收集细胞上清后第一时间离心去除细胞及细胞碎片，离心后的细胞上清再放入  -80℃冰箱保存，避免外泌体因细胞及细胞碎片存在而导致外泌体降解。3、无血清替代培养基并非指的是DMEM、1640 此类基础培养基，而是可以正常维持细胞生长的无血清替代培养基。2. 血液外泌体血液样本提取时，请大家注意血清和血浆都可以正常提取。如果提供全血，是无法完成的，必须提前做好血清或者血浆的分离。以下是全血、血浆、血清的区别1、全血：通过采血管采集后，经过抗凝处理的全部血液。2、血浆：经过抗凝处理的全血，进行低速离心后的上清液，为淡黄色液体。3、血清：不经过抗凝处理的血液，让它自行凝固，在进行低速离心后的上清液，为淡黄色液体。全血经过长时间放置，或通过冷冻、或高速离心后，会发生溶血，此时无法提取外泌体。所以，一定要提前做好血清或者血浆的分离，并且采血后尽快进行分离，期间不能经过冷冻，离心时转速不能太高，离心后取上清即可。 具体血液样本操作如下: 采血时间一般为早晨或上午 血浆：将抗凝管收集的全血2mL，迅速涡旋或用移液器Tip混匀； 血清：收集不加抗凝剂的全血2mL，加入到离心管或促凝管中，凝血后进行下一步离心； 2. 在1小时（室温条件下）或2小时（4℃条件下）内进行下面的操作：4℃，1900g（1568rpm）离心10分钟；3. 吸取约1mL上清转至洁净的1.5 mL 离心管中，16,000g (13,200rpm)，4℃，离心10分钟，小心吸取上清到新的离心管中；4. 放入-80℃冰箱中保存；5. 填写样本登记单，记录样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。3. 组织液3.1 尿液1. 收集尿液时，应该尽量选择受试者的“新鲜”尿液20ml，并注意避免细菌污染，收集前注意对饮食的控制；2. 并于3000×g离心15min，去除细胞或细胞碎片；3. -80℃冰箱中保存；4. 填写样本登记单，记录样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。3.2 脑脊液1. 收集集脑脊液10ml，避免受到血液污染；2. 并于3000×g 离心15min，去除细胞或细胞碎片；3. -80℃冰箱中保存；4. 填写样本登记单，记录样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。4. 外泌体1. 收集细胞上清或组织液10ml（血清1ml），抽提外泌体后，用100μL-500μLBuffer重悬沉淀（所用buffer 根据下游的蛋白分析则用蛋白裂解液， RNA分析则TriZol裂解）；2. 检测浓度，蛋白浓度≥1ug/ul，RNA浓度≥50ng/ul；3. 放入-80℃冰箱中保存。  样本类型 所需样本参考量（体积） 表征检测 （电镜、粒径、Marker蛋白检测） 组学研究 （NGS测序/蛋白质组） 细胞上清* 20 mL 50-60 mL 血  清 1 mL 2 mL 血  浆 1 mL 2 mL 尿  液 20 mL 50-60 mL 脑脊液 10 mL 20-30 mL 腹  水 10 mL 20-30 mL 羊  水 10 mL 20-30 mL 乳  液 5 mL 10-20 mL 精液 1 mL 2-4 mL 唾  液 5 mL 10-20 mL 备注：     *细胞上清液： 指常见的肿瘤细胞，如HeLa、A549、HepG2等； 然而神经细胞、干细胞分泌的外泌体量是肿瘤细胞的1/5~1/10左右，因此所需培养基上清量是肿瘤细胞的5-10倍。 技术支持更多技术资料您可关注宇玫博生物微信公众号获取，或访问宇玫博生物官网：获取，或致电咨询：技术热线：021-60521508